描述

1-NM-PP1是可滲透細胞的蛋白激酶D (PKD) 抑制劑，IC50 為0.398 μM。

相關類別

信號通路 >> 細胞凋亡 >> PKD

研究領域 >> 癌癥

靶點

Cdk7as/as:50 nM (IC50)

體外研究

來自Cdk7as / as或Cdk7 + / +細胞的Cdk7被免*疫沉淀并測試其對含Pol II CTD的融合蛋白（GST-CTD）和人Cdk2的激酶活性。從突變體中回收的Cdk7，但不是野生型細胞，被1-NM-PP1（1-NMPP1）抑制，與任一底物的IC50為~50nM。用Cdk7as /替換野生型Cdk7也使得對1-NM-PP1敏感的HCT116細胞生長。在沒有1-NM-PP1的情況下，野生型和Cdk7as / as細胞的群體倍增時間分別為~17.9和~20.2h，在異步培養中具有相似的細胞周期分布，表明Cdk7功能受到的影響*小。 F91G突變本身。純合的Cdk7as / as細胞對1-NM-PP1敏感，然而，在暴露1-NM-PP1 96小時后通過細胞活力（MTT）測定測得IC50~100nM。相反，野生型HCT116細胞對10μM1-NM-PP1具有抗性。 10μM1-NM-PP1的添加延緩了突變體的G1 / S進展，但不抑制野生型細胞的G1 / S進展。當與血清同時添加至Cdk7as /作為細胞時，1-NM-PP1防止在接下來的15小時內任何進展至S期。 24小時后，有證據表明，Cdk7as /作為從血清饑餓中直接釋放到含有1-NM-PP1的培養基中的細胞進入S期，而一部分保留在G1中。在血清添加后3小時或6小時添加1-NM-PP1可延遲S期進入約7小時或約3小時[1]。

激酶實驗

進行免*疫印跡和免*疫沉淀以及免*疫復合物的激酶測定。為了測量Cdk1 /細胞周期蛋白B組裝，從有絲分裂或G2細胞中提取（200μg總蛋白）與2μM1-NM-PP1或DMSO預孵育，然后加入500ng純化的細胞周期蛋白B1，氨基末端用六組氨酸標記和Myc表位，以及ATP再生系統。在指出的情況下，孵育用400ng純化的Csk1或600ng野生型或類似物敏感的T-環磷酸化的Cdk7 /細胞周期蛋白H / Mat1復合物補充。在室溫下90分鐘后，用抗Myc抗體免*疫沉淀Myc-細胞周期蛋白B和相關蛋白，并用抗Myc和抗Cdk1抗體對免*疫復合物進行免*疫印跡，并測試組蛋白H1激酶活性[1]。

細胞實驗

通過在無血清培養基中孵育48小時使野生型或Cdk7as /作為HCT116細胞同步，并釋放到含有10％胎牛血清的培養基中。進行與胸苷或諾考達唑的同步，并通過流式細胞術分析細胞周期分布。通過MTT測定法測量細胞活力[1]。

參考文獻

[1]. Larochelle S, et al. Requirements for Cdk7 in the assembly of Cdk1/cyclin B and activation of Cdk2 revealed by chemical genetics in human cells. Mol Cell. 2007 Mar 23;25(6):839-50.

1-(2-Methyl-2-propanyl)-3-(1-naphthylmethyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine

1-NM-PP1

1-tert-butyl-3-(naphthalen-1-ylmethyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine

1-(1,1-dimethylethyl)-3-(1-naphthalenylmethyl)-1H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine

1H-Pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine, 1-(1,1-dimethylethyl)-3-(1-naphthalenylmethyl)-

8278642

1-tert-butyl-3-(naphthalen-1-ylmethyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-4-amine

4-Amino-1-tert-butyl-3-(1'-naphthylmethyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidine

Mutant Kinases Inhibitor II

PP1 Analog II,1NM-PP1

1-NMPP1