常用名

埃博霉素B

英文名

epothilone B

CAS號

152044-54-7

分子量

507.682

密度

1.1±0.1 g/cm3

沸點

680.2±55.0 °C at 760 mmHg

分子式

C27H41NO6S

熔點

95-97oC

閃點

365.2±31.5 °C

體外研究

Epothilone B在HCT-116細(xì)胞系細(xì)胞毒性試驗中抑制HCT116細(xì)胞，IC50為0.8 nM [1]。埃坡霉素B（Patupilone）是一種微管（MT）靶向劑。如MTT細(xì)胞增殖試驗所示，處理72小時后，埃坡霉素B有效抑制細(xì)胞生長，IC50為6 nM，而濃度≤1nM則無細(xì)胞毒性。 Epothilone B在1nM的非細(xì)胞毒性濃度下顯著抑制transwell細(xì)胞遷移，并且在10nM時效果更明顯[2]。埃坡霉素B（Patupilone）是人成神經(jīng)管細(xì)胞瘤細(xì)胞系中新的非紫杉烷相關(guān)和非神經(jīng)毒性的微管穩(wěn)定劑。埃坡霉素B降低D341細(xì)胞系的增殖活性，IC50為0.53 nM;在D425Med細(xì)胞系中，IC50為0.37 nM;在DAOY細(xì)胞系中，IC50為0.19 nM。在D341Med細(xì)胞系中，埃坡霉素B對克隆形成存活的作用是在埃坡霉素B的劑量范圍內(nèi)，類似于增殖活性和活力水平（IC50,0.50-0.75nM）。然而，D425Med和DAOY細(xì)胞的克隆形成能力已經(jīng)在埃坡霉素B濃度降低10倍（IC50,30pM）時大大降低。這些結(jié)果總體上表明埃坡霉素B對不同成神經(jīng)管細(xì)胞瘤細(xì)胞系具有高效[3]。

體內(nèi)研究

用Epothilone B（Patupilone）或單獨的電離輻射治-療導(dǎo)致10天內(nèi)部分腫瘤生長受抑制，而聯(lián)合治-療發(fā)揮強大的超加性腫瘤生長控制，在隨訪期間完全腫瘤消退（P <0.005，用于電離輻射或單獨的埃坡霉素B與聯(lián)合治-療）[3]。

激酶實驗

在細(xì)胞溶質(zhì)細(xì)胞提取物中測定Asp-Glu-Val-Asp（DEVD）酶活性。用遞增濃度的埃坡霉素B（Patupilone）處理細(xì)胞6,12,24和48小時。然后通過胰蛋白酶/ EDTA收獲細(xì)胞，離心，并用預(yù)冷的PBS洗滌。將細(xì)胞沉淀懸浮于5體積的預(yù)冷緩沖液A（20mM HEPES-KOH [pH 7.5]，10mM KCl，1.5mM MgCl 2,1mM EDTA鈉，1mM EGTA鈉，1mM二硫蘇糖醇[DDT]，250mM）中蔗糖和0.1mM苯甲基磺酰氟[PMSF]補充有蛋白酶抑制劑[5mg / mL胃蛋白酶抑制劑A，10mg / mL亮肽素，2mg / mL抑肽酶，2mg / mL DTT和1mM PMSF]。在冰上孵育15分鐘后，通過冷凍和解凍破壞細(xì)胞。將細(xì)胞裂解物在4℃下以1000g離心10分鐘，并將上清液在100000g下進(jìn)一步離心30分鐘。將所得上清液（S-100級分）儲存在-80℃。為了確定半胱天冬酶3樣活性，將來自S-100級分的75μg蛋白質(zhì)在37℃下與比色性半胱天冬酶3底物N-乙酰基-Asp-Glu-Val-Asp對硝基苯胺（100mM; Ac- DEVD-pNA）和1mM dATP，終體積為120μL。使用GenTec分光光度計在405nm監(jiān)測胱天蛋白酶底物的切割[3]。