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單克隆抗體飼養(yǎng)細(xì)胞的操作步驟
1.材料
(1)小鼠(Balb/c或C57小白鼠)若干只。
(2)11.6%蔗糖溶液(經(jīng)10磅30min高壓**)。
2.操作方法
(1)拉頸處死小鼠。
(2)70%酒精浸泡**10min。
(3)用手術(shù)剪將小鼠腹部剪開一小口,剝開皮膚,露出腹腔。
(4)用注射器將4ml11.6%蔗糖溶液注入腹腔,用手指輕揉1min仍用該注射器回抽腹腔液體,加入離心管。
(5)1000r/min離心10min。
(6)取上清,以HAT選擇培養(yǎng)液將細(xì)胞制成懸液。臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)活細(xì)胞,使每毫升含40萬個(gè)活細(xì)胞。
(7)以1ml吸管將細(xì)胞種入微量培養(yǎng)皿,每孔0.05ml,含2萬個(gè)細(xì)胞,放入CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng),即可供細(xì)胞融合和克隆化之用。如果在融合后發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)孔中飼養(yǎng)細(xì)胞數(shù)量少,則可以在細(xì)胞換液時(shí)再加入一些。
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