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克隆化顯微鏡操作方法
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克隆法顯微鏡操作方法
在直徑6cm培養皿中,加入1ml1.0×108細胞懸液放置5%CO2飽和濕度,37℃溫箱中放置30min以上,倒置顯微鏡下,尋找那些與周圍相距甚遠的單個細胞,將毛細管口(一頭有直角彎頭毛細管,一頭連接一尺長乳膠管,用口控制液體進入)水平置放于液面上,左右微動,直到看見管口,對準細胞,吸入毛細管,將管中細胞移到預先加有2.0×104~5.0×104飼養細胞96孔板內,培養后,即可獲得單個細胞形成的克隆。
克隆法熒光激活分離法
用一種熒光激活細胞分類器(FluoresceinActivafedCellSorter,FACS)。其基本原理是:將細胞經熒光抗體染色后,經噴嘴形成單個細胞的線形液滴,在萊塞光激發下,熒光素發射熒光,此信號由光電倍增管接收,再結合細胞形態大小產生光散射信號,經電腦處理,產生信號并與預定的信號對比,根據細胞熒光強度及細胞大小不同,將細胞分成不同級別,在電場中發生偏離,而分別收集于不同容器中。
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單克隆抗體脾細胞選擇
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軟瓊脂克隆化法具體操作過程
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