大分子抗原因其具有兩個(gè)以上的抗原決定簇,而可用雙抗體夾心法測(cè)定,小分子半抗原如地高辛、茶堿等**以及T3,T4及睪酮等**因其只有一個(gè)抗原決定簇,從而無(wú)法使用雙抗夾心方法測(cè)定,只能采用競(jìng)爭(zhēng)抑制法測(cè)定。具體步驟如下: 1.先用抗小分子的特異抗體如雙抗體夾心法一樣包被固相并封閉。
2.同時(shí)加入待測(cè)樣本和酶標(biāo)的小分子,溫育一定時(shí)間后洗板;此步中,待測(cè)樣本的小分子將與酶標(biāo)小分子競(jìng)爭(zhēng)與固相上特異抗體結(jié)合。
3.加入酶底物,溫育顯色測(cè)定,顯色的強(qiáng)弱與待測(cè)樣本中的小分子含量成反比(圖2—4)。
這種測(cè)定模式中,需要得到小分子與酶的結(jié)合物,而小分子酶結(jié)合物一則在制備上不如抗體酶結(jié)合物簡(jiǎn)便,二則其純化亦頗為困難,結(jié)合有小分子的酶與游離酶之間難于分離。因此,有人嘗試在合成二或多聚體小分子的基礎(chǔ)上,建立雙抗夾心競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法測(cè)定小分子,測(cè)定的靈敏度和特異性均有所提高(圖2—5)。